小鼠基因操纵核心

＊老鼠基因操作中心现在开放了。请查看我们的新COVID-19标准操作流程在预定或到达核心之前。

我们的使命

基因操纵核心的使命是利用最新的基因组编辑技术，为波士顿儿童医院的研究人员提供易于获取、高效、成本效益高和质量可控的转基因小鼠模型。

转基因和基因靶向模型已经被用于产生小鼠模型几十年了，在我们继续提供这项服务的同时，CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Regions/ CRISPR associated protein)技术代表了一种更强大、更精确的工具来创建基因编辑小鼠，这已经成为基因编辑核心服务的首选。

CRISPR/Cas9利用靶向特异性引导RNA、Cas9蛋白和/或供体模板，通过微注射引入单细胞胚胎。CRISPR/Cas9介导的基因组编辑依赖于目标序列特异性引导RNA和Cas9核酸酶诱导的双链断裂(DSB)的联合作用。细胞修复机制通过两种途径修复DSB: 1)非同源端连接(non-homologous end joining, NHEJ)， 2)同源定向修复(homology directed repair, HDR)。NHEJ是一种容易出错的高效机制，它主动修复DSB，在此过程中引入核苷酸的插入或删除(InDel)，常导致终止密码子过早，导致基因功能丧失，从而产生基因敲除(KO)。HDR是一种效率较低但更精确的修复机制，通过提供单链或双链DNA的供体模板，两侧带有同源臂的特定变化，来引入精确的修饰。

我们能为你的研究提供什么帮助

基因操纵核心从2015年底开始利用这一步创始人代技术来产生基因敲除和敲入、条件等位基因、报告基因的插入、Cre驱动和多位点的KO。现在，核心所进行的几乎所有基因靶向都是基于CRISPR/Cas9的。

该核心还作为胚胎和/或精子形式的冷冻小鼠品系的内部仓库，以保存有价值的小鼠品系。低温保存服务节省了存活菌落的空间和成本，并防止了宝贵菌种的意外损失。

核心还提供资源和复杂的小鼠模型生成的全面知识;建立系基因分型、育种策略等。核心在评估新的基因操纵技术、其有效性和需求、成本和限制方面保持警惕。服务费用的成本效益是通过对Longwood/Harvard其他核心设施提供的服务费用的年度审查确定的，费用会相应调整。此外，我们会回应用户关于他们需要的支持和服务类型的反馈。CRISPR/Cas9基因组编辑、胚胎干细胞的培养和基因修饰、胚胎植入前小鼠胚胎的微操作和通过小鼠存活手术进行胚胎移植所需的技术，最好由一个核心设施来完成。这些程序需要质量控制的试剂，显微注射和小鼠手术需要专门的技能、设备和专用的小鼠群。开发和维持这些程序的能力的成本对大多数研究人员来说都是望而却步的，特别是那些很少产生新小鼠系的研究人员。

将这些技术整合到一个服务于多个调查人员的核心设施中，可以让单个调查人员获得除非由非常昂贵的商业供应商提供，否则他们可能无法获得的专门技术。

利用CRISPR/Cas9技术实现小鼠核心体内基因组编辑服务，并生成100多个新的小鼠模型。

我们由NIH/NICHD U54 HD090255和NIH RO1 NS38253资助，并得到IDDRC．