＊老鼠基因操作核心现已开放。请审阅我们的新COVID-19标准操作流程在预定或到达核心之前。
我们的使命
基因操作核心的任务是利用最新的基因组编辑技术，为波士顿儿童医院的研究人员提供易于获取，高效，成本效益和质量控制的转基因小鼠模型。
转基因和基因靶向模型已经被用于生成小鼠模型几十年了，当我们继续提供这项服务时，CRISPR/Cas9(聚类规则间隔短回文区域/ CRISPR相关蛋白)技术代表了一种更强大和精确的工具来创建基因编辑小鼠，这已经成为核心基因编辑的选择服务。
CRISPR/Cas9利用靶向特异性引导RNA、Cas9蛋白和/或供体模板通过微注射引入单细胞胚胎。CRISPR/Cas9介导的基因组编辑依赖于目标序列特异性引导RNA和Cas9核酸酶诱导的双链断裂(DSB)的联合作用。细胞修复机制通过两种途径修复DSB: 1)非同源末端连接(NHEJ)和2)同源定向修复(HDR)。NHEJ是一种容易出错的高效机制，可以主动修复DSB，并在此过程中引入核苷酸的插入或删除(InDel)，通常会导致过早的终止密码子，导致基因功能丧失，从而产生基因敲除(KO)。HDR是一种效率较低但更精确的修复机制，通过提供单链或双链DNA形式的供体模板来引入精确的修饰，单链或双链DNA的特定变化两侧有同源臂。
我们如何帮助你的研究
基因操纵核心从2015年底开始利用这种单步创始人代技术产生基因敲除和敲入、条件等位基因、报告基因插入、Cre驱动程序和多个位点的KO。现在几乎所有由核心执行的基因靶向都是基于CRISPR/Cas9的。
该核心还可作为胚胎和/或精子形式的低温保存小鼠品系的内部储存库，以存档有价值的小鼠品系。低温保存服务节省了活菌落的空间和成本，并防止了宝贵菌株的意外损失。
核心还提供了复杂小鼠模型生成的资源和全面知识;创始人系基因分型、育种策略等。核心在评估新的基因操纵技术、其有效性和需求、成本和局限性方面保持警惕。服务费的成本效益是通过对其他朗伍德/哈佛核心设施提供的服务费进行年度审查来确定的，并相应地调整费用。此外，我们会就用户所需要的支持和服务类型回应用户的反馈。CRISPR/Cas9基因组编辑、ES细胞的培养和基因修饰、植入前小鼠胚胎的微操作以及通过小鼠生存手术进行胚胎移植所需的技术，最好由一个核心设施来实现。这些程序需要质量可控的试剂，微量注射和小鼠手术需要专门的技能、设备和专用的小鼠菌落。开发和维持执行这些程序的能力的成本对大多数研究人员来说是令人望而却步的，特别是那些很少产生新的小鼠系的研究人员。
将这些技术整合到一个为多个调查人员服务的核心设施中，可以让个人调查人员获得专业技术，否则他们可能无法获得这些技术，除非由非常昂贵的商业供应商提供。
小鼠核心采用CRISPR/Cas9技术实现了体内基因组编辑服务，生成了100多个新型小鼠模型。
本课题由NIH/NICHD U54 HD090255和NIH RO1 NS38253资助IDDRC．
